Ahoj Ivane,
podle toho, co píšeš, bychom ti snad mohli poskytnout vše, co potřebuješ.
Mám na tebe dotaz: z čeho při plánování vycházíš, máš k dispozici nějaké konkrétní materiály? Nějakou vědeckou práci nebo podobně, co tě vlastně inspirovalo a podle čeho chceš výzkum řídit - a podle čeho se dá taky odhadnout, jestli použitým postupem vůbec máme šanci zjistit to, co zkoumáme. Rozumíš, je mrzuté, když se snažíš něco vybádat, věnuješ tomu hafo času a prostředků, zatím ti z toho nic neleze... A pak projde okolo někdo, kdo věci náhodou trochu rozumí, a řekne ti "hele děláš to všechno blbě, postupem, který jsi použil, tam změny, které hledáš, najít nemůžeš, protože xy" :-)
Jinak ohledně postupů ve výzkumu myších tkání vřele doporučuji obracet se na Chido, která ti již taky psala - je to v Brmu prakticky jediný člověk (alespoň pokud vím) vyloženě profesionálně se zabývající výzkumem v bio-vědách, přitom je schopná věci velmi dobře vysvětlit i laikovi; v Brmlabu nenajdeš povolanější osobu.
Co se týče zpracování preparátů na mikrotomu, ten máme v plánu zaběhnout já s Pinkym. Původní plán byl dělat na něm parafinové preparáty; jestli se dá využít i na řezy ze zmrazáku, zatím nevíme (není to standardní přístroj používaný na patologii v nemocnicích; víc o něm nevím, ještě jsem ho ani neviděla). Takže bude jedině fajn, když se do toho opřeš a i nás tím budeš motivovat k tomu, abychom s tím společně hnuli. Ohledně řezů, jejich metodiky zhotovení a prohlížení tak, abychom tam viděli, co hledáme, mám k dispozici konzultanta-patologa.
S mikroskopem (zvaným makroskop - pochopíš, až uvidíš) se má věc tak, že t.č. nemá světelný zdroj pro prosvěcování preparátů. Ten je nutné zkonstruovat - pravděpodobně to nebude nic nijak zvlášť obtížného, ale je prostě třeba se k tomu dokopat. Makroskop je pod Pinkyho patronátem, takže je dobré se obrátit na něj a domluvit se (taky už ti v tomhle vláknu psal).
Brm,
Barney
Dne 09.03.2016 v 8:19 Ivan Petrov napsal(a): > Ahoj, > > děkuju všem za poskytnuté rady a vyjadřený zájem, budu se snažit konečné > odpovědět a udělat to v stručnosti. > > Samozřejmě, fakt toho, že budu pracovat většinu času sám, nepovažuju za > velký problém, neboť původně se to tak i plánovalo, takže co se tohto týče, > vše je v naprostém pořádku. Také jsem počítal s tím, že u nebudu mít k > dispozici profesionální aparaturu, kterou de facto ani nepotřebuju a dá se, > jak bylo řečeno, něčim vhodným nahradit. Vlastně jedinou věci z technického > vybavení, která je nejdůležitější a potřebuje alespoň trochu nějakou > profesionální úroveň, je právě ten optický mikroskop. Plus Dewarová nádoba > vhodného objemu, protože pochybuju, že by se zrovna dala udělat "na koleně". > > O legislativných omezeních zacházení se živým zvířetěm jsem poučen, navyše > by mě nikdy nenapadl onen postup se zmrazením živého tvora, přímo zhmotněný > sadizmus, jak by se dalo říct :) Ostatně je pravda, že plánovali jsme > použít jenom myší mozek a to takovým způsobem, že ho nakrájíme na krychle > se stranou 1 až 5mm - podle toho, jak dobře to půjde, neboť s myším mozkem > jsem doposud nepracoval. Ovšem, aby to mělo alespoň nejmenší věděckou > hodnotu, chtěli jsme na každý způsob zmrazování (s jiným kryoprotektivem) > použít několik desítek vzorků + kontrolní skupina, samopochopitelně. > Celkově to vychází v rozmezí 100 - 200 vzorků, ale přesný výpočet, kolik > budeme potřebovat vzorků a tím pádem i myší, uděláme co nejdřív. > > Také do konce týdne uděláme seznam potřebné aparatury (kromě mikroskopu a > té nádoby to budou po většině drobnosti) a pravděpodobně vylíčíme přesný > postup práce, prottože na detailech jsme se doposud nezhodli. > > Tekutý dusík by byl velmi vhod a jsem přesvědčen, že i mikrotom by rozhodně > ulehčil našou "řeznickou" práci - byli bychom velmi rádi, kdyby tyto věci > byli k poskytnutí. > > S pozdravem, > > Petrov I.V.