Ahoj,
děkuju všem za poskytnuté rady a vyjadřený zájem, budu se snažit konečné odpovědět a udělat to v stručnosti.
Samozřejmě, fakt toho, že budu pracovat většinu času sám, nepovažuju za velký problém, neboť původně se to tak i plánovalo, takže co se tohto týče, vše je v naprostém pořádku. Také jsem počítal s tím, že u nebudu mít k dispozici profesionální aparaturu, kterou de facto ani nepotřebuju a dá se, jak bylo řečeno, něčim vhodným nahradit. Vlastně jedinou věci z technického vybavení, která je nejdůležitější a potřebuje alespoň trochu nějakou profesionální úroveň, je právě ten optický mikroskop. Plus Dewarová nádoba vhodného objemu, protože pochybuju, že by se zrovna dala udělat "na koleně".
O legislativných omezeních zacházení se živým zvířetěm jsem poučen, navyše by mě nikdy nenapadl onen postup se zmrazením živého tvora, přímo zhmotněný sadizmus, jak by se dalo říct :) Ostatně je pravda, že plánovali jsme použít jenom myší mozek a to takovým způsobem, že ho nakrájíme na krychle se stranou 1 až 5mm - podle toho, jak dobře to půjde, neboť s myším mozkem jsem doposud nepracoval. Ovšem, aby to mělo alespoň nejmenší věděckou hodnotu, chtěli jsme na každý způsob zmrazování (s jiným kryoprotektivem) použít několik desítek vzorků + kontrolní skupina, samopochopitelně. Celkově to vychází v rozmezí 100 - 200 vzorků, ale přesný výpočet, kolik budeme potřebovat vzorků a tím pádem i myší, uděláme co nejdřív.
Také do konce týdne uděláme seznam potřebné aparatury (kromě mikroskopu a té nádoby to budou po většině drobnosti) a pravděpodobně vylíčíme přesný postup práce, prottože na detailech jsme se doposud nezhodli.
Tekutý dusík by byl velmi vhod a jsem přesvědčen, že i mikrotom by rozhodně ulehčil našou "řeznickou" práci - byli bychom velmi rádi, kdyby tyto věci byli k poskytnutí.
S pozdravem,
Petrov I.V.
2016-03-07 11:13 GMT+01:00 P j-pi@seznam.cz:
Ahoj,
jen pro doplnění, v labu máme jakýsi (zatím nevyzkoušený) mikrotom. Tekutý dusík můžu "nafasovat" když se dá vědět dost předem.
P
Dne 7.3.2016 v 10:05 Radka Haneckova napsal(a):
Ahoj! Je to v skutku zajimavy projekt! Jak uz psala Barney, obecne plati ze Brmlab nema profesionalni
laboratorni
vybaveni kterym disponuji akademicke instituce zabyvajici se vyzkumem tohoto typu. Vsechno si delame "na kolene", primarne samozrejme protoze
na
to nemame potrebne finance. Ale zkusim ti aspon trochu poradit, jak by k tvemu tematu bylo mozne pristupovat experimentalne. V prvnim rade - co konkretne planujes pouzit jakozto biologicky material? Mluvis o mysi nervove tkani - kdyz tim mas
na
mysli celou (zivou) mys, rada bych te upozornila ze experimenty s zivymi zviraty jako jsou mysi jsou prisne regulovane zakonem o ochrane zvirat:
http://eagri.cz/public/web/mze/legislativa/pravni-predpisy-mze/tematicky-pre...
- takze kdybys treba planoval neco na zpusob "mysi neco injikuju a pak ji
zkusim zmrazit" uz se dle toho zakonu jedna o experiment na pokusnem zvirati na ktere je nutne mit nejdriv akreditaci, pak schvaleny projekt pokusu etickou komisi, prostory urcene k chovu pokusnich zvirat atd. Jelikoz se jedna o (verejny) skolsky projekt, mohli by z toho pro tebe vyplynout dost neprijemne dusledky, proto bych ti delani cehokoli na zive mysi vubec nedoporucovala. Schodnejsi alternativa by byla prace jenom s casti mysi. Tady jsou v podstate dve alternativy, a to prace s celou tkani/organem nebo s
kulturou
zivych bunek. Kultura zivych bunek ale ma za predpoklad prave to drahe laboratorni vybaveni - potrebujes specificke zivne medium ve kterem bunky muzou rust, sterilni laboratorni plast a sklo, a hlavne (a to je
nejvetssi
problem) specialni inkubator ktery krom fyziologicke teploty umi udrzovat parcialni tlak CO2 na konkretni urovni - co je extremne drahe vybaveni a
je
tezke neco takoveho sestrojit sam (hlavne kdyz rikas ze te tlaci cas). Proto mi asi nejrealistictejsi prijdou pokusy na tkani - napriklad prace
s
mysim mozkem. Zakon o ochrane zvirat zabiti mysi nedefinuje jako pokus, takze zabit mys a nasledne z ni vypreparovat mozek je z teto strany naprosto v poradku. Anatomicky atlas mysi: http://www.informatics.jax.org/cookbook/imageindex.shtml Samozrejme ze takto komplexni tkan nejde udrzet na zivu, ale myslim ze zajimave data o kryoprotektivite ruznych latek by slo nasbirat i na cerstve byt mrtve tkani: ihned po vypreparovani umistnit mozek do fyziologickeho roztoku a nasledne jej zkouset perfuzovat latkami ktere chces zkoumat. Nasledne
mozek
zmrazit, rozmrazit, narezat na tenke rezy, obarvit a mikroskopem zkoumat jak moc zustala zachovana bunecna struktura. Na takovyhle postup nepotrebujes zas az tak drahou techniku - mrazeni musi probehnout co nejrychleji, takze uplne nejlepsi by byl tekuty dusik (ktery lze
zakoupit),
alternativne suchy led. Krajet pak lze ziletkou nebo skalpelem, na
barveni
a pripravu na mikroskopovani staci zakladni vybaveni typu mikroskopovaci sklicka a opticky mikroskop. Zde najdes inspiraci jak se takovy preparat dela: https://cs.wikipedia.org/wiki/Histologick%C3%BD_prepar%C3%A1t Tak snad jsem pomohla aspon radou, hodne stesti!
chido
2016-03-07 8:45 GMT+01:00 Blanka "Barney" Laudová blandrium@gmail.com:
Ahoj Ivane,
zájem minimálně jednoho člena jsi právě získal. Co se dalších bodů tvého dotazu týče, bude věc trochu komplikovanější. Faktem je, že "biolabí" sekce Brmlabu je v současnosti prakticky neaktivní, hlavně pro zaneprázdněnost jejích členů (kterých je navíc v rámci celého Brmu jen hrstka; většina členů Brmlab je prioritně IT a elektrotechnicky zaměřená). Což není fakticky překážkou pro tvou práci tam; jen to znamená, že musíš počítat s tím, že ačkoli budeš mít podporu členů, gró tvé práce bude ležet na tobě samém. Druhá věc je vybavení. Tedy - co představuje "technické zajištění"? Chemlab je v rámci možností vybaven velice dobře; co se techniky týče, nemám vůbec představu, co bys mohl potřebovat. Profesionální aparaturu ti pochopitelně nezajistíme. Dá-li se potřebné zařízení "vyrobit", pak jsi na správném místě.
Zkus nám tedy blíž nastínit svou práci a jak a s čím by měla probíhat, lidi, co by se ve věci mohli angažovat, se určitě ozvou.
Brm,
Barney
Dne 07.03.2016 v 0:20 Pavel Ruzicka napsal(a):
Preposilam na nas biolab mailing list.
On 03/07/2016 12:12 AM, Ivan Petrov wrote:
Dobrý deň,
již v dávne době zahlédl jsem na Vaše stránce http://brmlab.cz/project/start oznámení o možnosti získat podporu
nebo
zájem lidí o svůj projekt pod Vaší "záštitou", ovšem jenom teď s tím potřebuju poradit - a kvůli tomu, že nejsem ve Vaší organizaci zbehlý, obrácím se na Vás takou obecnou a veřejnou cestou, jaká je táto.
Skutečnosti je, že jsem studentem oktávy osmiletého gymnázia v
Teplicích
a spolu se spolužáčkou se podílime na vypracováni seminární práce.
Ovšem
kvůli náročnosti tématu, a to studie vlyvu krygoenních teplot na
nerové
buňky myši domáce pod ochranou kryoprotektiv, jsme již několikrát narazili na technické potíže v uskutočnění praktické části naše práce, konkretnějí v sehnání prostor, potřebného zařízení v podobě přístrojů
a
chemikalií. Ale po tom, co jsem prohlédl Vaši stránku a na vlastné oči se přesvědčil, že pracujete nebo plánujete pracovat na mnoha
zaujímavých
projektech s velkými perspektivy a z oblastí různých vědných oborů a, jako mohu soudit, minimálním financováním, ujistil jsem sám sebe, že v někom z Vašeho týmu by mohla moje práce vyvolat alespoň nějaký zájem a dovolil bych si se dočkat kolektivní podpory a solidarity.
Podstatou celé moje práce je zkoumání rozdílů v poškozeních nervové tkáně při kryogenním zmrazování za použití různých typů tzv. kryoprotektiv, příp. funkčnosti po rozmrazení a vypracování
nejlepšího a
nejefektivnějšího způsobu a metodiky rozmrazování tkáně pro zachování všech jeji funkcí. Je naprosto zřejmé, že při takovém popisu náplně
naše
seminárky učitelé jenom koulili očima :) a potřebné technické
zajištění
a odbornou pomoc jsme, pochopitelně, nedostali.
Osobně se v tomhle ohledu považuji za nadšence, i když hranice mého vzdělání formálně nepřesáhla maturitní zkoušku - právě proto velice
bych
nerád zahazoval tenhle projekt do "popelnice" a rozvíjel ho dál,
mnohem
dál, než by se mohlo očekávat od středoškolské seminární práce.
Jediné komplikace mohl by uskutečnit časový rámec, který nás tlačí čím dál tím více, ale doufám, že časová vytíženost nebude na místě a při důkladnem fungování všechno by mělo být v potřebném čase splněno.
Doufám, že Vás moje otázka nezaskočila a mohu očekávat od Vás alespoň zpětnou vazbu ohledně toho, jestli mohu získat podporu a zájem členů Vášho týmu nebo nikoliv.
S pozdravem a úctou,
Petrov I.V. _______________________________________________ Rada mailing list Rada@brmlab.cz https://brmlab.cz/cgi-bin/mailman/listinfo/rada
Biolab mailing list Biolab@brmlab.cz https://brmlab.cz/cgi-bin/mailman/listinfo/biolab
Biolab mailing list Biolab@brmlab.cz https://brmlab.cz/cgi-bin/mailman/listinfo/biolab
Biolab mailing list Biolab@brmlab.cz https://brmlab.cz/cgi-bin/mailman/listinfo/biolab
Dne 7.3.2016 v 03:14 SysOp napsal(a):
Ahoj, tohle plati jen pro zpravu s major-msgid 32, pro ostatni je to jinak.
V priloze
posilam pseudokod funkce, ktera to vyhodnocuje, jak mi to vyplivla IDA.
1 byte dat (5 byte zpravy) se pouzije, jako index do tabulky, kde
jsou 4 byty
pro kazdou hodnotu, ale myslim, ze pro odpoved na "mode pers" neni
vyplnena,
nebo alespon ne cela.
Se zapnutim tracovani to pri zprave 10 32 00 0b 00 03 43 00 44 00 04 00 12 70 00 02 10 03 5a pise
"redemarrage TR
mode : 0x02" - reboot a pri 10 32 00 09 00 02 46 00 47 00 02 00 16 75 10 03 5a pise "init mode perso"
Jeste posilam pseudokod funkce, ktera pravdepodobne vyypisuje
debugovaci hlasky
pro jednotlive zpravy (mozna i vola odeslani zpravy, to nevim).
SysOp.
On 03/02/16 23:20, P wrote:
udělal jsem i pár dalších pokusů a vyšlo mi:
10 - start 32 00 - cmd opcode (16b) 08 00 - délka (16b), max hodnota 0x10 00 ff 00 00 00 00 00 16 75 - data (délka B) 10 03 - stop? suffix? (16b) a5 - xor
- stanice odpoví vždycky stejně -> nejspíš naznačuje že to je špatně
Vyzkoušel jsem i pár dalších možných CMD, ale stanice na nic nereaguje.
Bude to asi chtít koukat víc do assembleru.
P